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三重四极杆液质联用仪的前提工作需要哪些准备

发布时间:2022-12-06      阅读:360
  每个四级杆质量分析器有三种工作方式:离子全通过、扫描和离子选择监测。全离子通过是指四级杆不施加直流电压,这样就不过滤离子,所有带电离子全部通过;扫描是指在给定的质荷比范围内,依次采集每个质量数的信号;而选择离子监测模式,只是采集的某个或某几个质荷比的离子信号。
  如果要用三重四级杆液质联用仪测试样品,需要提前准备什么呢?
  1、选择合适的电离方式
  常用的电离方式是大气压电离源(API),包括电喷雾(ESI)、大气压化学电离源(APCI)。
  1.1大气压电喷雾离子源(ESI源)
  原理:待测物经液相分离,通过毛细管进入电离源,被离子源的高压电场电离,同时在脱溶剂气和温度的共同作用下雾化,最终形成雾状的带电液滴,随着溶剂不断蒸发,液滴的体积不断变小,电荷在液滴中不断富集,最终在富集到一定程度时,发生“库伦爆炸”,把液滴炸碎,在多次爆炸后,待测物最终被离子化。
  适用范围:适合于离子型和极性分析物,灵敏度高,能给出分子量的信息,是目前常用的离子源;化合物无需具有挥发性;是分析热不稳定化合物的方法;能生成一系列多电荷离子,特别适用于蛋白、多肽类生物大分子;流速控制在0.5mL/min内。
  1.2大气压化学电离源(APCI源)
  原理:是常压下的气态化学电离过程。待测物通过毛细管喷雾来雾化,同时在高温和脱溶剂气的共同作用下快速蒸发溶剂,然后电晕针尖端高压放电,使经过电晕针的待测物发生电离。
 适用范围:适合于非极性至弱极性样品,小分子样品以及抗菌素和碱性药物等,且具有一定的挥发性;在相对较高的流速下灵敏度更高。
  2、正负离子化模式的选择
  正离子模式:适合于碱性化合物,可用甲酸或乙酸对样品进行酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
  负离子模式:适合于酸性化合物,可用氨水对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团,如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。
  3、流动相的选择
  常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物及一些挥发性的缓冲盐,如甲酸铵、乙酸铵等,浓度小于10mmol/L(过高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器);还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水调节PH,浓度小于1%。禁止使用不挥发性的磷酸盐、硼酸盐等(在离子源会沉淀并堵塞毛细管等),禁止使用会抑制离子化过程的表面活性剂(表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据,因此不能使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器)、清洁剂和离子对试剂等,禁止使用盐酸、硫酸等无机酸。
  有机试剂必须为色谱级及以上,水用娃哈哈的纯净水。
  送样前一定要摸好LC条件,能够基本分离。在液相上摸好的条件,注意尤其是流动相的组成转化成合适的LC-MS条件。
  4、样品前处理注意事项
  由于液质的流速较小(ESI一般为0.2mL/min),所以配制样品的溶剂极性强度不能太大,尽量小于起始比例,否则,会出现保留时间偏移等问题。
  样品必须过0.22μm滤膜过滤,不得有颗粒物。
  样品的溶剂必须是色谱纯,最好和流动相比例一致。
  样品中不允许含有金属离子、表面活性剂(不用洗洁精洗瓶子)、磷酸盐、硼酸盐等不挥发盐。
  样品pH在5-7范围内,严禁含有无机或有机强酸强碱。
  质谱是灵敏度很高的仪器,进样浓度一定不能太高,1-2μg/mL左右就行,太高的浓度对仪器来说容易造成残留,而且定量不准确。
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